更新時(shí)間：2023-07-12
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廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
生產(chǎn)地址：
深芬儀器非洲豬瘟檢測(cè)儀使用說(shuō)明書
l 本試劑盒用于檢測(cè)血清非洲豬瘟（ASF）存在與否。
l 有效期：6個(gè)月
l 保存條件：2-8℃
l 本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷
檢測(cè)前準(zhǔn)備工作：
1. 請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。
2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶*溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃
3. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材：
1. 檢測(cè)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱或水浴鍋
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成：
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說(shuō)明書 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片 | 2片 | |
密封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | |
酶標(biāo)包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
陰性對(duì)照 | 0.5ml*1管 | 0.5ml*1管 | 2-8℃保存 |
陽(yáng)性對(duì)照 | 0.5ml*1管 | 0.5ml*1管 | 2-8℃保存 |
檢測(cè)抗原-HRP | 5 ml×1瓶 | 10 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
20×濃縮洗滌液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
備注：
1.（96T/48T）打開包裝后請(qǐng)及時(shí)檢查所有物品是否齊全。
實(shí)驗(yàn)原理：
試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被非洲豬瘟抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗原，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUT OFF值相比較，從而判定標(biāo)本中非洲豬瘟（ASF）的存在與否。
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
注意事項(xiàng)：
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品,不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
操作步驟：
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各50μL；
3. 待測(cè)樣本孔加待測(cè)樣本10μL，樣本稀釋液40μL；
4. 隨后陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴鍋孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
計(jì)算：
1. 試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；
陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15。
2. 臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
3. 陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性
4. 陽(yáng)性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽(yáng)性
深芬儀器非洲豬瘟檢測(cè)儀試劑盒性能：
1. 準(zhǔn)確性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15，說(shuō)明試驗(yàn)結(jié)果有效。
2. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
4. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
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